一、全细胞荧光----用什么染料可以实现全细胞荧光？
顾名思义，就是整个细胞都可以荧光。
染料：亲脂性羰花青染料或吖啶橙就可以
原理：当用一种波长的光(如紫外光)照射某种物质时，这种物质会在极短的时问内发射出较照射波长为长的光(可见的光)，这种光就称为荧光。有些生物材料受到紫外线照射后能直接发出荧光称自发荧光(或直接荧光)；有的生物材料受紫外线照射后并不发光，但当它吸收荧光染料后，也同样产生荧光，称间接荧光(或次生荧光)。与生物学有关的荧光现象有五种：
1、 自发荧光 如叶绿索、维生素A的红色荧光、胶原纤维的蓝绿色荧光、脂褐素的蓝色荧光等。
2、 诱发荧光 通过诱导剂作用而发的荧光，如甲醛蒸气处理可诱发细胞和组织中生物单胺类(儿茶酚胺、5—羟色胺等)产生荧光。
3、荧光染料染色荧光 即经染色后荧光染料与细胞中某些成分结合而产生的荧光。
4、酶诱发荧光 通过细胞内酶的作用，使某些不发荧光的物质转换为发荧光的产物。如细胞内的脂酶可使不发荧光的二醋酸荧光素分解为发荧光的荧光素。
5、免疫荧光 荧光染料和抗体以共价键结合，这种标记的抗体再和相应的抗原形成抗原—抗体复合物，经激发后发射荧光，用以辨认抗原。
细胞和组织所产生的荧光必须通过荧光显微镜进行观察或通过显微荧光光度计进行定量测定。除少数生活物质含有自发荧光外，大多数研究需外加荧光染料，进行特异性结合而得以显示。.
几种荧光染料对细胞染色的观察
细胞吖啶橙荧光染色的观察 ：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。
染的部位：应该是细胞核、线粒体和细胞膜都可以荧光，细胞质不太清楚可不可以……
二、萤火虫是用什么能量发光？
萤火虫的发光原理是因为在其发光器的部位，存在著一种含磷的发光质与一种催化酵素。萤火虫在发光器上会有一些气孔，由气孔引入空气后，发光质就会透过酵素的催化与氧进行氧化作用。然后透过这样的机制来发出光。
萤火虫透过这样的作用来发出光芒。而这样发出来的光，由於大部份的能量都转为光能，只有少部份化为热能，所以称之为冷光。也就因为发光质与光能的转换相当有效率，所以萤火虫可以发光相当长的一段时间。而萤火虫本身也可以控制进不进行这样的作用来控制发不发光。
而发光器的构造也使得萤火虫的发光更亮。萤火虫的发光器由数层细胞组成。在皮肤下有发光细胞，在发光细胞下有反光细胞，可以反射发光细胞发出的光来使光看来更亮。如何，是不是很神奇呢？如果您想知道更多关於萤火虫的发光原理，请按此前往参观，您一定会有更高深的收获！
三、急求间接免疫荧光双染实验步骤
FITC：
操作步骤
将纯化的IgG抗体对PH9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，
透析后抗体液移入小烧杯中
↓
称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC～1mg/1ml DMSO)
使终浓度为1mgFITC／1mlDMSO
FITC／IgG比例:如IgG浓度为1mg／ml，FITC／IgG比例约为50μgFITC／mgIgG；
如IgG为5～10mg／ml，则比例为25μgFITC／ml IgG
在10ml小烧杯中先放入抗体
↓
按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中
↓
将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h
↓
用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱
↓
收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定F／P
比值。第二个荧光素峰为游离荧光素
计算:
2.87×A495
F／P＝————————
A280-0.35×A495
合适的F／P值为2～4。
注意事项：
1. FITC保存于4℃暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称取，以避免潮解。
2. FITC-DMSO液要临用时配制。
3. 碳酸盐缓冲液要新鲜配制。
四、荧光素标记的生物素应该用什么溶解
这四个不是一码事,HRP和AP是酶,二抗上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光（例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下,能在黑暗中发出荧光；也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质）；FITC为异硫氰酸荧光素,本身就是黄绿色荧光,二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察；生物素一般也是挂在二抗上的,利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶,由酶催化底物,生成终产物,这个终产物也是不溶于水的.